胚层期胚胎二次冷冻复苏移植1例的出生结局和儿童发育情况随访

滑盘的冷藏保存是专用配子技术(ART)治疗中就会的举足轻重组成员成部分，通过冷藏保存可以将病人过多的滑盘保存下来，提高病人的累积到哺乳不下。滑盘的 冷藏保存可以在滑盘受精的假定先决条件同步进行，如有的区域内最同样冷藏遗传物质期滑盘或卵细胞裂期滑盘，现在随着培喂养框架的完善，越来越多的IVF区域内同步进行配子细胞培 喂养以期提高哺乳不下和降低多滑哺乳不下，因此研究成果者不够倾向于同步进行配子细胞冷藏保存。冷藏方式可以为流程 化慢速冷藏，也可以为乙酸乙酯冷藏。我们区域内自 2004年起，对第3天植入后的滑盘全部同步进行配子细胞培喂养，如有配子细胞过渡到则同步进行乙酸乙酯冷藏保存。然而在临床工作中就会最常存在一些偶发的不慎原因，如病人在衰退植入日因间歇性性诱因很难同步进行滑盘植入，根本很难将衰退的滑盘丢下或再进一步次冷藏后择期衰退植入。但是我们很难亦非定配子细胞二次乙酸乙酯冷藏后的相容性如何。目在此以后关于人类滑盘二次冷藏的史料较少，尽管有史料美联社了一些亦非诊都能在滑盘二次冷藏衰退植入后得到活产，但这些美联社多为第一次冷藏为遗传物质 期滑盘或卵细胞裂期滑盘，衰退后培喂养至配子细胞再进一步次冷藏[1。4]。Kumasako等[3]显然二次冷藏不就会降低紧致 滑的甘蔗不下，但是关于配子细胞冷藏衰退后再进一步次冷藏嗣后 苏植入的美联社并不多。且据我们所知，尚无研究成果来分 析配子细胞二次乙酸乙酯冷藏衰退植入后的不止后生于命运。在 此亦非诊美联社中就会，我们所述了配子细胞二次冷藏衰退植入 后新后生儿的不止后生于命运，并举动病人的孩子同步进行长期以来 随访检视，详细记录了此幼儿的身材受精原因。一、临床资讯病人34岁，丈夫35岁，因输卵细胞管因效原发早产 到我院配子区域内就诊，早产年限6年。根据世上卫 后生组成员织基准，男方参有数于是以最常。病人2005年在本 区域内同步进行卵细胞巢刺激后**细胞，在**细胞间隔所引入的即刻 哺乳细胞建议书按照本区域内的最同样同步进行，在上一间隔的黄 体期开始应用即刻性腺激效释放激效激动剂(GnRH-a)，当垂体降至降调节后，用卵细胞泡刺激效(FSH，果纳芬，北极星)同步进行卵细胞巢刺激。当实质上卵细胞泡高约降至18～ 20 rnlTl时，注射人绒毛膜即刻性腺激效(HCG，艾泽，北极星)，38 h后同步进行超声引导的卵细胞泡穿刺来获**细胞母细胞内。合计得到13枚卵细胞母细胞内，同步进行最同样配子后， 13枚卵细胞母细胞内卵细胞，在卵细胞后第3天检视滑盘的卵细胞裂原因，挑选2枚优质滑盘同步进行植入。植入后多余的 11枚卵细胞裂期滑盘经病人知情一致同意后全部同步进行配子细胞培喂养，在卵细胞后第5日或第6日分别检视配子细胞过渡到原因及形态。引入Gardner评分系统对配子细胞同步进行评分，该病人合计过渡到2枚配子细胞，配子细胞评分分别为4BB和4BC。将所过渡到的配子细胞按照我区域内最同样方式[5]同步进行乙酸乙酯冷藏，说明操为：配子细胞冷藏在此以后同步进行人工皱缩，即用微波 系统在远离内细胞内民团的滋喂养细胞内相连薄弱处原子笔，让囊腔液流不止，使细胞内皱缩成民团；然后将配子细胞抽不止含有7．5％DMSO和7．5％乙二醇的预平衡点液中就会平衡点 2 min，此后移入乙酸乙酯冷藏液中就会平衡点30 s，将滑盘转 移至冷藏的环(cryoloop的环)上，直接挤不止氩气保存。 病人美味间隔植入未能得到哺乳，**细胞3个月后患 者同步进行冷藏配子细胞衰退植入。人工间隔准备粘液，月经 第2"-4天行最同样B超核查，赋予酚雌二醇(补佳乐，先灵，德国)吗啡，吗啡剂量根据病人以往的粘液原因 调整(2～18 rag／d)。B超监测粘液后生长原因，当粘液深 度降至8 ITlln时静脉注射黄体酮(20 rng×2 d，40 mgX 2 d，20--一40 mg×1 d)，注射后第6天行配子细胞衰退植入。植入在此以后1 d按照我区域内最同样方式[5]同步进行配子细胞衰退：准备配子细胞衰退液，在滑盘培喂养皿内配制0．33 mol／L、0．2 mol／L蔗糖溶液和基本培喂养液(GMoPS Plus， Vitrolife，瑞典)，从氩气中就会放进隙有配子细胞的冷藏的环，空气 中就会停留5 S后，将滑盘分作挤不止上述衰退液中就会，时间分 别为2 min、3 min和5 min。衰退后的2枚配子细胞除此以外同步进行 微波专用产卵，选择在远离细胞内民团的透光隙上部位切割透光隙的1／4左右。此后将配子细胞移人提早作好的 配子细胞培喂养液(G2，ⅥnDlife，瑞典)中就会，放置37℃、6％OQ 和5％Q培喂养箱内培喂养16 h。植入在此以后检视配子细胞的扩大 和长成原因。 该病人在配子细胞衰退植入日间歇性急性阑尾炎不能 同步进行配子细胞植入，在病人知情一致同意的在此以后提下再进一步次按照上述配子细胞乙酸乙酯冷藏操作步骤同步进行滑盘冷藏。病人手脚 术6个月后再进一步次同步进行冷藏配子细胞衰退植入，说明操作步骤同上，配子细胞衰退后16 h同步进行植入，病人成功哺乳，并于孕38周分娩一有益夫妻俩，体长52 CITI，增重3 550 g。 由于这是本区域内第1例配子细胞二次冷藏的病人，所以我们对其女同步进行了长期以来的随访。孩子的父亲身材高大为 185 cm，母亲身材高大为167 cm孩子1岁时，身材高大83 cm， 增重12 kg；3岁时，身材高大97cm，增重21kg，身体健 康，无疾病；5岁时，身材高大117 cm，增重31 kg；7岁时，身材高大135cm，增重40 kg；9岁时身材高大154cm，增重50 kg；12岁时，身材高大168 cm，增重62 kg；10岁时，不止现受精；12岁时月经初潮。该小女孩好动，直接参与学学校管乐队、学校棒球队等经常性活动，并获取很好的成绩，其常人于是以最常，学习成绩在班级在此以后5名。二、讨论在此亦非诊中就会，病人得到13枚成熟卵细胞母细胞内，13枚卵细胞母细胞内卵细胞，经过培喂养后过渡到2枚配子细胞并玻璃 化冷藏保存。病人在原计划配子细胞衰退植入日间歇性急性阑尾炎，在其知情一致同意的在此以后提下将衰退后的配子细胞再进一步次冷藏保存。此为临床工作中就会一些难以避免的原因。如果将病人滑盘丢下非最常可惜，而滑盘再进一步次冷藏保存 的相容性尚不清楚。到目在此以后为止，虽然从未有一些紧致 滑在二次冷藏后得到活产的亦非诊美联社，但都是第一次 滑盘冷藏时为遗传物质期或卵细胞裂期滑盘，衰退后培喂养至配子细胞先决条件再进一步次冷藏。本研究成果是首次对配子细胞二次乙酸乙酯 冷藏后得到的活产同步进行长期以来随访的亦非诊美联社。 有学者曾经用小鼠滑盘研究成果连续急剧冷藏衰退对滑盘的不良影飘，他们推测与未能冷藏的滑盘相比，冷藏滑盘 在长成时的细胞内有数略少，且小鼠滑盘都能在成功的 连续急剧冷藏衰退3次后仍然具有体外受精并能[6]。在此亦非诊中就会，我们对比了两次冷藏在此以后后配子细胞的形态学变异色，第1次冷藏是在第5天，配子细胞为4期，质量为 4BB，第一次衰退后培喂养16 h，配子细胞无论如何长成，成为 6期配子细胞，质量为6BB；第2次冷藏衰退后，培喂养16 h 配子细胞质量为6BB。配子细胞形态从外观上看，两次冷藏后 没有顶多异色，配子细胞细胞内存活更佳，貌似配子细胞先决条件滑盘的 二次乙酸乙酯冷藏对滑盘的受精无太大不良影飘。比对原 因，我们显然可能与一般而言几个多方面有关。首先，配子细胞在冷藏之在此以后同步进行了微波皱缩，将配子细胞腔内液全部放 不止，使配子细胞腔崩落，待配子细胞无论如何皱缩后再进一步同步进行配子细胞的 乙酸乙酯冷藏，这样都能减少冷藏现实后生活中就会冰晶的过渡到， 降低对滑盘的烧伤。有研究成果也证实配子细胞的人工皱缩 都能有效地提高配子细胞冷藏后衰退的存活不下[7-9]。而且冷藏配子细胞衰退后的专用产卵也非最常举足轻重，在滑盘冷藏现实后生活中就会，人类配子细胞的透光隙变硬，就会限制滑盘的向外蝌蚪 不止，有研究成果显然配子细胞在扩大现实后生活中就会急剧地变大皱缩， 如果在透光隙正下方的卡的次有数多了，配子细胞就就会消亡[10]。而且，冷藏衰退后的配子细胞，由于即将衰退后囊 紧致腔还处于皱缩精神状态，滑盘和透光隙之间的间隙相比之下 大于卵细胞裂期滑盘的间隙，因此配子细胞的专用产卵不够亦非保。我们的有数据推测，未能经过专用产卵的配子细胞，衰退后过夜培喂养，无论如何长成的比重(340A)远低于微波产卵后的配子细胞(85％)，不够高的长成比重意味着不够高的着床 机就会。其次，配子细胞的冷藏保存不同于卵细胞裂期滑盘，它 自身有很多优点。都能受精至配子细胞先决条件的滑盘经过 二次选择，受精并能异色最常的滑盘从未被首轮；配子细胞的 细胞内为有数多，相比较是滋喂养细胞内层细胞内，烧伤后修嗣后并能强，少有数细胞内死亡后对滑盘受精并能不良影飘小；配子细胞 的细胞内不够小，呈梭形，表面积／体积比大，对脱水、嗣后水造成的体积变异色抵抗力不够佳[11]。因此我们猜测配子细胞 二次冷藏后细胞内没有烧伤的诱因可能与此有关。 目在此以后虽然有一些滑盘二次冷藏得到活产的报 道，但是对新后生儿长期以来随访的美联社非最常少见。在此亦非诊中就会，配子细胞经过二次乙酸乙酯冷藏后，仍然都能成功 甘蔗，病人在足月分娩一于是以最常增重的新后生儿，也提示 配子细胞二次冷藏似乎并不不良影飘新后生儿的不止后生于命运。嗣后习史料，我们推测在2011年的一项小型研究成果中就会，作 者比对了一次冷藏和二次冷藏后滑盘不止后生于命运的顶多 异色[12]。在文中就会一次冷藏，就是将2PN期或卵细胞裂期的滑盘同步进行冷藏保存，衰退后植入；二次冷藏指的是 冷藏的滑盘衰退后同步进行体外培喂养至配子细胞先决条件，再进一步进 行冷藏。结果提示二次冷藏组成员的双滑不下低于一次冷藏组成员，他们显然是二次冷藏组成员植入的滑盘有数较少造 成的。此研究成果还提示二次冷藏组成员的不止后生于增重略低 一次冷藏组成员，尽管没有统计分析顶多异色；在二次冷藏组成员未能 发后生先天异色最常，在一次冷藏组成员发后生1例先天异色最常；两 组成员除此以外未能发后生死滑或新后生儿死亡。尽管这些并非配子细胞 二次冷藏的研究成果，但从一定程度上反映了滑盘在二 次冷藏后并不不良影飘新后生儿的不止后生于命运。我们举动新 后生儿随访至9岁，该幼儿身材受精于是以最常，常人受精于是以 最常，心理受精于是以最常。与之在此以后冻融滑盘植入(FET)不止 后生幼儿的随访论点一致[13,7]。Pelkonen等比对 了FET不止后生于孩子的先天异色最常的发后生原因，显然 FET不止后生于孩子发后生先天异色最常的比重与美味植入相似，此后Pelkonen等[14]对FET始祖孩子同步进行了一 项随访3年的研究成果，推测FET与美味植入不止后生于始祖 的身材受精是相似的。还有研究成果推测ART后不止后生于 始祖的神经运动受精多方面与共存哺乳始祖无显著顶多 异色，显然他们的神经受精、社就会感情及语言学习并无 顶多异色[117]。可见滑盘冷藏对新后生儿长期以来受精的影 飘与美味植入滑盘相似。而从我们的亦非诊美联社来 看，配子细胞的二次冷藏也是相对亦非保的。 我们将配子细胞二次乙酸乙酯冷藏后的滑盘同步进行植入 后得到成功哺乳，足月分娩一有益夫妻俩，并同步进行很短12年的随访，此幼儿身材受精于是以最常，常人受精于是以最常，心理受精于是以最常。显然此配子细胞二次冷藏后滑盘仍然具有很好的甘蔗潜能和受精潜能。但此亦非诊仅为个例美联社，配子细胞连续急剧冷藏是否是就会造成滑盘的烧伤仍不明 亦非，植入连续急剧冷藏的滑盘是否是亦非保还必须进一步的研究成果，因此在临床工作中就会，我们仍应来使避免滑盘的连续急剧冻融。参考史料略。原始不止处：王雪，甄绿然，孙于是以怡，郁琦等，配子细胞期滑盘二次冷藏衰退植入1例的不止后生于命运和幼儿受精原因随访[J],配子柳叶刀，2018,27(12).